Fluorescence Rezonans Enerji Transferi (Fret)
Fluorescence Rezonans Enerji Transferi (Fret), donoru həyəcanlandıran dövlət enerjisinin, intermolecular elektrik cütlərinin qarşılıqlı əlaqəsi ilə qəbuledici vəziyyətə köçürüldüyü radiativ enerji ötürmə prosesidir. Bu proses fotonları cəlb etmir və buna görə də radiativ deyil. Bu Aralayın sürətli, həssas və sadə olmağın üstünlükləri var.
Fret ASSAY-da istifadə olunan boya eyni ola bilər. Ancaq əksər tətbiqlərdə fərqli boyalar həqiqətən istifadə olunur. Qısacası, işıqlı rezonans enerjisinin transferi, donor qrupu həyəcanlandırıcıya (boya 2) bir cüt dipolin (boya 2) transferidir. Ümumiyyətlə, donor flüorofor qrupunun emissiya spektri qəbuledici qrupun udma spektri ilə üst-üstə düşür. "İki flüorophor arasındakı məsafə uyğun olduqda (10 - 100 A), donordan flüorofor enerjisinin transferi qəbulediciyə qədər müşahidə edilə bilər." Enerji ötürülməsi üsulu reseptorun kimyəvi quruluşundan asılıdır:
1. Molekulyar titrəmə çevrilir, yəni enerji köçürməsinin parlaq işığı yox olur. (Reseptor yüngül bir quentridir)
2. Emissiya reseptorun özündən daha sıxdır, nəticədə ikincil flüoresan spektrində redshiftlə nəticələnir. " (Reseptorlar parlaq emitterlərdir).
Donor Qrupu (EDANS) və qəbuledici gen (DABCYL), HİV proteasinin təbii substratına bərabər şəkildə əlaqələndirilir və substratın ayrılmadığı zaman, EDLARı QUENLE və sonra florin üçün təyin edilə bilməz. HİV-1 proteazın bağlantısı ilə, EDANS artıq DABCYL tərəfindən söndürülmür və sonradan Elan Luciferazaları aşkar edilə bilər. Proteaz inhibitorlarının mövcudluğu, EDANların flüoresan intensivliyindəki dəyişikliklərlə izlənilə bilər.
Fret peptidləri, peptidaza qeyri-qanuni öyrənmək üçün əlverişli vasitələrdir. Reaksiya prosesi davamlı olaraq izlənilə bildiyindən, ferment fəaliyyətinin aşkarlanması üçün əlverişli bir metod təqdim edir. Donor / qəbuledici tərəfindən peptid istiqrazlarının hidrolizinin hidrolizinin ardından istehsal olunan parıltı, nanomolar konsentrasiyalarında ferment fəaliyyətini təmin edir. Fret peptidin bütöv olduqda, daxili flaşın qəfil yox olması göstərir, ancaq donor / qəbuledici fasilələrin qarşısında hər hansı bir peptid istiqrazı, fasiləsiz aşkar edilə bilən bir flaş buraxır və ferment fəaliyyəti daha sonra miqdarda saxlanıla bilər.
Saat: 2025-07-02