Flüoresan rezonans enerji ötürülməsi (FRET)
Flüoresan rezonans enerjisinin ötürülməsi (FRET) qeyri-radiativ enerji ötürmə prosesidir, burada donorun həyəcanlanmış vəziyyətinin enerjisi molekullararası elektrik cütlərinin qarşılıqlı təsiri ilə akseptor həyəcanlı vəziyyətinə köçürülür.Bu proses fotonları əhatə etmir və buna görə də qeyri-radiativdir.Bu analizin üstünlükləri sürətli, həssas və sadədir.
FRET analizində istifadə olunan boya eyni ola bilər.Ancaq əksər tətbiqlərdə fərqli boyalar əslində istifadə olunur.Qısaca desək, işıqlı rezonans enerjisinin ötürülməsi donor qrupu həyəcanlandıqda bir cüt dipolun donordan (boya 1) akseptora (boya 2) ötürülməsidir.Ümumiyyətlə, Donor florofor qrupunun emissiya spektri Akseptor qrupunun udma spektri ilə üst-üstə düşür."İki flüorofor arasındakı məsafə uyğun olduqda (10 - 100 A), flüorofor enerjisinin donordan qəbulediciyə ötürülməsi müşahidə edilə bilər."Enerji ötürülməsi üsulu reseptorun kimyəvi quruluşundan asılıdır:
1. Molekulyar vibrasiyaya çevrilir, yəni enerji ötürülməsinin parlaq işığı yox olur.(Reseptor işıq söndürəndir)
2. Emissiya reseptorun özündən daha intensivdir və nəticədə ikincili flüoresan spektrində qırmızı sürüşmə baş verir.”(Reseptorlar işıq yayıcılardır).
Donor qrupu (EDANS) və akseptor geni (DABCYL) HİV proteazının təbii substratı ilə bərabər şəkildə bağlıdır və substrat ayrılmadıqda, DABCYL EDANS-ı söndürə bilər və sonra flüor üçün aşkar edilə bilməz.HİV-1 proteazı kəsildikdən sonra EDANS artıq DABCYL tərəfindən söndürülmür və EDANS lusiferazları sonradan aşkarlana bilər.Proteaz inhibitorlarının mövcudluğu EDANS-ın flüoresans intensivliyindəki dəyişikliklərlə izlənilə bilər.
FRET peptidləri peptidazın qeyri-spesifikliyini öyrənmək üçün əlverişli vasitədir.Onun reaksiya prosesi davamlı olaraq izlənilə bildiyi üçün ferment aktivliyini aşkar etmək üçün əlverişli bir üsul təqdim edir.Donor/akseptor tərəfindən peptid bağlarının hidrolizindən sonra yaranan parıltı, nanomolyar konsentrasiyalarda ferment aktivliyinin ölçüsünü təmin edir.FRET peptidi bütöv olduqda, daxili flaşın qəfil yox olduğunu göstərir, lakin donor/akseptorun qarşısındakı hər hansı bir peptid bağı pozulduqda, davamlı olaraq aşkar edilə bilən bir parıltı buraxır və sonra fermentin fəaliyyətini ölçmək olar.
Göndərmə vaxtı: 14 avqust 2023-cü il