Yüksək dəqiqlikli alət kimi HPLC, istifadə zamanı düzgün şəkildə işlədilməzsə, asanlıqla bəzi problemli kiçik problemlərə səbəb ola bilər.Ən çox görülən problemlərdən biri sütunun sıxılma problemidir.Xromatoqrafın nasazlığını necə tez aradan qaldırmaq olar.HPLC sistemi əsasən rezervuar şüşəsindən, nasosdan, injektordan, sütundan, sütun temperatur kamerasından, detektordan və məlumat emal sistemindən ibarətdir.Bütün sistem üçün sütunlar, nasoslar və detektorlar əsas komponentlər və problemlərə meyilli olan əsas yerlərdir.
Sütun təzyiqinin açarı HPLC istifadə edərkən çox diqqət tələb edən sahədir.Sütun təzyiqinin sabitliyi xromatoqrafik pik forması, sütunun səmərəliliyi, ayırma səmərəliliyi və saxlama müddəti ilə sıx bağlıdır.Sütun təzyiqinin sabitliyi təzyiq dəyərinin sabit dəyərdə sabit olması demək deyil, əksinə təzyiqin dəyişmə diapazonunun 345kPa və ya 50PSI arasında olması deməkdir (sütun təzyiqi sabit olduqda və yavaş-yavaş dəyişən zaman gradient elüsyonundan istifadə etməyə imkan verir).Çox yüksək və ya çox aşağı təzyiq sütun təzyiqi problemidir.
HPLC uğursuzluqlarına və həll yollarına ən çox meyllidir
1, yüksək təzyiq HPLC istifadəsində ən ümumi problemdir.Bu, təzyiqin qəfil yüksəlməsi deməkdir.Ümumiyyətlə, aşağıdakı səbəblər var: (1) Ümumiyyətlə, bu, axın kanalının tıxanması ilə əlaqədardır.Bu məqamda biz onu hissə-hissə araşdırmalıyıq.a.Əvvəlcə vakuum nasosunun girişini kəsin.Bu nöqtədə, PEEK borusu maye ilə dolduruldu ki, mayenin istəyə görə damladığını görmək üçün PEEK borusu həlledici şüşədən kiçik olsun.Maye damlamırsa və ya yavaş damlayırsa, həlledici filtr başlığı bloklanır.Müalicə: 30% azot turşusunda yarım saat isladın və ultra saf su ilə yuyun.Maye təsadüfi damlarsa, həlledici filtr başlığı normaldır və yoxlanılır;b.Təmizləmə valfını açın ki, mobil faza sütundan keçməsin və təzyiq əhəmiyyətli dərəcədə azalmazsa, ağ filtr başlığı bloklanır.Müalicə: Filtrlənmiş ağ başlıqlar çıxarıldı və yarım saat ərzində 10% izopropanol ilə sonikasiya edildi.Təzyiq 100PSI-dən aşağı düşdüyünü fərz etsək, süzülmüş ağ baş normaldır və yoxlanılır;c.Sütunun çıxış ucunu çıxarın, təzyiq azalmazsa, sütun bloklanır.Müalicə: Bufer duzunun tıxanmasıdırsa, təzyiq normal olana qədər 95% yuyun.Əgər maneə daha yüksək dərəcədə qorunmuş materialdan qaynaqlanırsa, normal təzyiqə doğru tələsmək üçün indiki mobil fazadan daha güclü bir axın istifadə edilməlidir.Əgər yuxarıda göstərilən üsula görə uzun müddətli təmizləmə təzyiqi azalmazsa, sütunun giriş və çıxışı əksinə alətə qoşulmuş hesab edilə bilər və sütun mobil faza ilə təmizlənə bilər.Bu zaman sütunun təzyiqi hələ də azalmayıbsa, sütun girişinin ələk lövhəsi yalnız dəyişdirilə bilər, lakin əməliyyat yaxşı olmadıqda, sütun təsirinin azalmasına səbəb olmaq asandır, buna görə də daha az istifadə etməyə çalışın.Çətin problemlər üçün sütunun dəyişdirilməsi nəzərdən keçirilə bilər.
(2) Yanlış axın sürəti təyini: Düzgün axın sürəti sıfırlana bilər.
(3) Yanlış axın nisbəti: axınların müxtəlif nisbətlərinin özlülük indeksi fərqlidir və daha yüksək özlülüklü axının müvafiq sistem təzyiqi də daha böyükdür.Mümkünsə, daha aşağı özlülüklü həlledicilər dəyişdirilə və ya yenidən qurulub hazırlana bilər.
(4) Sistem təzyiqinin sıfır sürüşməsi: maye səviyyəsi sensorunun sıfırını tənzimləyin.
2, təzyiq çox aşağıdır (1) adətən sistemin sızması səbəb olur.Nə etməli: Hər bir əlaqəni, xüsusən də sütunun hər iki ucundakı interfeysi tapın və sızma sahəsini sıxın.Postu çıxarın və PTFE filmini müvafiq qüvvə ilə bərkidin və ya düzün.
(2) Qaz nasosa daxil olur, lakin bu zaman təzyiq adətən qeyri-sabitdir, yüksək və aşağı olur.Daha ciddi, nasos mayeni udmaq mümkün olmayacaq.Müalicə üsulu: təmizləmə klapanını açın və 3~5ml/dəq axın sürətində təmizləyin.Əgər belə deyilsə, hava qabarcıqları xüsusi bir iynə borusu ilə egzoz klapanında aspirasiya edilmişdir.
(3) Mobil faza axını yoxdur: rezervuar şüşəsində mobil faza olub-olmadığını, lavabonun mobil fazaya batırılıb-batırılmadığını və nasosun işlək olub olmadığını yoxlayın.
(4) İstinad klapan bağlı deyil: istinad klapan yavaşlamadan sonra bağlanır.Adətən 0,1-ə enir.Referans klapan bağlandıqdan sonra ~ 0,2 ml/dəq.
Xülasə:
Bu yazıda yalnız maye xromatoqrafiyasında ümumi problemlər təhlil edilir.Təbii ki, praktik tətbiqimizdə daha çox başqa problemlərlə qarşılaşacağıq.Səhvlərin aradan qaldırılmasında biz aşağıdakı prinsiplərə əməl etməliyik: hipotetik amillə problem arasındakı əlaqəni müəyyən etmək üçün hər dəfə yalnız bir amili dəyişdirin;Ümumiyyətlə, nasazlıqların aradan qaldırılması üçün hissələri dəyişdirərkən, tullantıların qarşısını almaq üçün sökülən bütöv hissələrin yenidən yerinə qoyulmasına diqqət yetirməliyik;Yaxşı qeyd vərdişinin formalaşdırılması xətaların aradan qaldırılmasının uğurunun açarıdır.Yekun olaraq, HPLC-dən istifadə edərkən nümunənin əvvəlcədən hazırlanmasına və avadanlıqların düzgün işləməsinə və saxlanmasına diqqət yetirmək vacibdir.
Göndərmə vaxtı: 18 sentyabr 2023-cü il