Yüksək dəqiq bir alət olaraq, HPLC istifadə zamanı düzgün şəkildə işləmirsə, bəzi çətinlikli kiçik problemlərə asanlıqla səbəb ola bilər. Ən çox görülən problemlərdən biri sütun sıxılma problemidir. Səhv bir xromatoqrafı necə həll etmək olar. HPLC sistemi əsasən bir su anbarı, bir nasos, injektor, bir sütun, bir sütun temperaturu palatası, bir detektor və məlumat emalı sistemi ibarətdir. Bütün sistem üçün sütunlar, nasoslar və detektorlar əsas komponentlər və problemlərə meylli əsas yerlərdir.
Sütun təzyiqinin açarı, HPLC istifadə edərkən diqqətə ehtiyacı olan sahədir. Sütun təzyiqinin sabitliyi xromatoqrafik pik forması, sütun səmərəliliyi, ayrılma səmərəliliyi və tutma müddəti ilə sıx bağlıdır. Sütun təzyiq sabitliyi, təzyiq dəyərinin sabit bir dəyərdə sabit olduğunu ifadə etmir, əksinə təzyiq dalğalanma çeşidi 345kpa və ya 50psi arasındadır (sütun təzyiqi sabit və yavaş-yavaş dəyişdikdə gradient elanı istifadəsinə icazə verilir). Çox yüksək və ya çox aşağı təzyiq bir sütun təzyiq problemidir.
HPLC uğursuzluqlarına və həllərinə ən çox meyllidir
1, yüksək təzyiq HPLC istifadə üçün ən çox yayılmış problemdir. Bu, təzyiqin qəfil artması deməkdir. Ümumiyyətlə, aşağıdakı səbəblər var: (1) Ümumiyyətlə, bu, axın kanalının tıxanması ilə əlaqədardır. Bu anda, bunu özünüzə baxmalıyıq. a. Əvvəlcə vakuum nasosunun girişini kəsin. Bu nöqtədə, peek borusu maye ilə dolduruldu ki, peek borusu, mayenin iradənin istədiklərini yoxlamaq üçün həlledici şüşədən daha kiçik idi. Maye yavaş-yavaş damcı deyilsə və ya damcı deyilsə, həlledici filtr başı bloklanır. Müalicə: Yarım saat yarım saat ərzində 30% azot turşusunda isladın və ultrapur suyu ilə yuyun. Maye təsadüfi damcı varsa, həlledici filtr başı normaldır və yoxlanılır; b. Mobil fazanın sütundan keçməməsi üçün təmizlik klapanını açın və təzyiqin əhəmiyyətli dərəcədə azalmadığı təqdirdə, filtr ağ başı bloklanır. Müalicə: Süzülmüş ağ başlıqlar yarım saat ərzində 10% izopropanol ilə söküldü və sonişləşdi. Təzyiqin 100psi-dən aşağı düşdüyünü güman edərək, süzülmüş ağ baş normaldır və yoxlanılır; c. Təzyiqin azalmadığı təqdirdə sütunun çıxışının sonunu çıxarın, sütun bloklandı. Müalicə: Bu tampon duz tıxanmasıdırsa, təzyiq normal olana qədər 95% yuyun. Əgər tıxanma daha yüksək qorunan materialdan qaynaqlanırsa, bu mobil fazadan daha güclü bir axın normal təzyiqə doğru tələsmək üçün istifadə edilməlidir. Uzunmüddətli təmizlik təzyiqi yuxarıdakı üsula görə azalmırsa, sütunun giriş və çıxışı əksinə alətə qoşula bilər və sütun mobil fazası ilə təmizlənə bilər. Bu zaman, sütun təzyiqi hələ də azalmırsa, sütun girişindəki ələk boşqab dəyişdirilə bilər, ancaq əməliyyat yaxşı deyil, sütun effektinin azalmasına səbəb olmaq asandır, buna görə daha az istifadə etməyə çalışın. Çətin problemlər üçün sütun əvəzlənməsi nəzərə alına bilər.
(2) Yanlış axın dərəcəsi qəbulu: düzgün axın sürəti yenidən qurula bilər.
(3) Yanlış axın nisbəti: Flows müxtəlif nisbətlərinin özlülük indeksi fərqlidir və daha yüksək özlülüklü axınının müvafiq sistem təzyiqi də daha böyükdür. Mümkünsə, aşağı özlülük həllediciləri dəyişdirilə və ya yenidən qurula və yenidən qurula bilər.
(4) Sistem təzyiqi sıfır sürüşmə: maye səviyyəli sensorun sıfırını tənzimləyin.
2, təzyiqin çox aşağı (1) ümumiyyətlə sistem sızması səbəb olur. Nə etməli: Hər bir bağlantı, xüsusən də sütunun hər iki ucundakı interfeysi tapın və sızma ərazisini sıxın. Postu çıxarın və PTFE filmini müvafiq güclə sıxın və ya düzün.
(2) Qaz nasosa girir, lakin təzyiq ümumiyyətlə bu anda qeyri-sabitdir, yüksək və aşağı. Daha ciddi, nasos mayeni udmaq olmaz. Müalicə metodu: 3 ~ 5ml / dəq olan təmizlik klapanını və təmiz bir axın sürətində açın. Yoxdursa, Hava Bubbles xüsusi bir iynə borusundan istifadə edərək egzoz qapağında arzu edildi.
(3) Heç bir mobil faza axını: lavabonun mobil fazaya batırılıb və nasosun işlədildiyini anbar şüşəsində bir mobil fazanın olub olmadığını yoxlayın.
(4) İstinad klapan qapalı deyil: İstinad klapanı yavaşlamadan sonra bağlanır. Ümumiyyətlə 0,1-ə enir. İstinad klapanını bağladıqdan sonra ~ 0.2ml / dəq.
Xülasə:
Bu sənəddə maye xromatoqrafiyada yalnız ümumi problemlər təhlil edilir. Əlbəttə, praktik tətbiqimizdə daha çox digər problemlərlə qarşılaşacağıq. Günahkarlığa baxmayaraq, aşağıdakı prinsiplərə əməl etməliyik: hipotetik amil və problem arasındakı əlaqəni müəyyən etmək üçün bir anda bir amili dəyişdirin; Ümumiyyətlə, problemlərin aradan qaldırılması üçün hissələri əvəz edərkən, tullantıların qarşısını almaq üçün sökülmüş bütöv hissələrin geri qoyulmasına diqqət yetirməliyik; Yaxşı bir rekord vərdiş meydana gətirən, günah işinin müvəffəqiyyətinin açarıdır. Sonda HPLC istifadə edərkən, nümunə əvvəlcədən müalicəyə və avadanlıqların düzgün istismarına və istismarına diqqət yetirmək vacibdir.
Saat: 2025-07-02