Fon
Afamelanotid kimi də tanınan Melanotan I, əczaçılıq tədqiqatlarında getdikcə əhəmiyyətli rol oynamağa hazır olan 13 amin turşusundan ibarət xətti polipeptiddir. Melanotan I üçün əsas ingilis adları Melanotan-1 və Afamelanotidedir. α-melanosit stimullaşdırıcı hormon α-MSH-nin sintetik analoqu kimi Melanotan I eritropoetik protoporfiriyanın yaratdığı fotohəssaslıq pozğunluqlarını müalicə etmək üçün istifadə edilə bilər. Hal-hazırda, Melanotan I məhsullarının əksəriyyəti yalnız tədqiqat istifadəsi üçün etiketlənmişdir və hələ insan tətbiqi üçün nəzərdə tutulmamışdır. Ənənəvi bərk fazalı sintezdə qatran seçimi birləşmənin effektivliyinə və məhsulun son təmizliyinə əhəmiyyətli dərəcədə təsir göstərir.
Əsas məlumat
Çin adı: Melanotan 1
İngilis adı: Melanotan-1
Şirkət nömrəsi: GT-A006
CAS №: 75921-69-6
Ardıcıllıq: SYS{Ne}EH{D-Phe}RWGKPV-NH2
Molekulyar Formula: C78H111N21O19
Molekulyar Çəki: 1646.88
Hazırlanma üsulu
I. Fmoc-Val-Amino Qatranının Hazırlanması
Addım 1:0,45 mmol/q əvəzetmə dərəcəsi ilə 11,11 q (5 mmol) Ramage Amide AM qatranını çəkin və bərk fazalı reaktora əlavə edin. 30 dəqiqə ərzində qatranı şişirtmək üçün DCM əlavə edin, sonra süzün. DMF ilə üç dəfə yuyun. 20% piperidin (v/v) olan DMF məhlulu əlavə edin və 5 dəqiqə reaksiya verin. Başqa 20% piperidin DMF məhlulu əlavə edin və aralarında bir DMF yuma ilə 10 dəqiqə reaksiya verin. Reaksiya başa çatdıqdan sonra süzün və üç dəfə DMF ilə yuyun.
Addım 2:5,09 q Fmoc-Val-OH, 2,02 q HOBT (1-hidroksibenzotriazol) və 2,32 ml DIC (N,N'-diizopropilkarbodiimid) 0°C-də DMF-də həll edin. Tam həll edildikdən sonra qarışığı reaksiya sütununa əlavə edin və otaq temperaturunda 1 saat reaksiya verin. Mənfi nəticəni təmin edərək, ninhidrin testindən istifadə edərək reaksiyanın gedişatını izləyin. Reaksiya başa çatdıqdan sonra Fmoc-Val-amino qatranını əldə etmək üçün DMF ilə üç dəfə yuyun.
II. Melanotan I-in tam qorunan qatran peptidinin hazırlanması.
Addım 1:Yuxarıdakı Fmoc-Val-aminoresinə DMF məhlulunda 20% piperidin əlavə edin (həcm nisbəti). 5 dəqiqə reaksiya verin, sonra DMF məhluluna 20% piperidinin başqa bir hissəsini əlavə edin və 10 dəqiqə reaksiya verin. İnterval ərzində bir dəfə DMF ilə yuyun. Reaksiya başa çatdıqdan sonra vakuum altında qurudun və üç dəfə DMF ilə yuyun.
Addım 2:5,06 q Fmoc-Pro-OH, 2,02 q HOBT (1-hidroksibenzotriazol) və 2,32 ml DIC (N,N'-diizopropilkarbodiimid) 0°C-də DMF-də həll edin. Tam həll edildikdən sonra qarışığı reaksiya sütununa əlavə edin və otaq temperaturunda 1 saat reaksiya verin. Mənfi nəticələr əldə olunana qədər ninhidrin testindən (Kaiser testi) istifadə edərək reaksiyanın gedişatına nəzarət edin. Tamamlandıqdan sonra Fmoc-Pro-Val-aminoresini əldə etmək üçün DMF ilə üç dəfə yuyun.
Addım 3:Addım 2-də təsvir edilən üsula əməl edərək, hər bir amin turşusunu Melanotan I ardıcıllığına uyğun olaraq ardıcıl olaraq birləşdirin. Ac-Ser(tBu)-OH birləşmə reaksiyası başa çatdıqdan sonra üç dəfə DMF, üç dəfə DCM (diklorometan) və üç dəfə metanol ilə yuyun. 23,89 q tam qorunan Melanotan I qatranı ilə bağlanmış peptid əldə etmək üçün vakuum altında qurudun.
III. Melanotan I xam peptidinin hazırlanması
23,89 q tam qorunan Melanotan I qatranı ilə bağlanmış peptid dairəvi dibli kolbaya yerləşdirildi. 0°C-də 250 ml əvvəlcədən hazırlanmış parçalanma kokteyli (TFA:tioanizol:fenol:triizopropilsilan:su = 82,5:7,5:5:3:2 həcmində ibarətdir) yavaş-yavaş qarışdıraraq əlavə edildi. Qarışıq aşağı temperaturda 0,5 saat, sonra otaq temperaturunda 2 saat reaksiya verdi. Sonra parçalanma məhlulu vakuum altında süzülür. Bu məhlul yavaş-yavaş qarışdıraraq 2 L buz kimi soyuq susuz dietil efirə əlavə edildi. Xam peptid filtrasiya yolu ilə təcrid olunmuş, üç dəfə buz kimi soyuq dietil efirlə yuyulmuş və 8,55 q Melanotan I xam peptidi alınmışdır.
IV. Melanotan I Təmizlənmiş Peptidin Hazırlanması
Addım 1:Xam Melanotan I peptidini 100 ml təmizlənmiş suda həll edin və xam peptid məhlulu əldə etmək üçün 0,45 μm membrandan süzün.
Addım 2:Yüksək performanslı maye xromatoqrafiyadan (HPLC) istifadə edərək xam Melanotan I peptidini təmizləyin. Mobil faza A (0,05% trifluorosirkə turşusu sulu məhlulu) və mobil faza B (asetonitrildə 0,05% trifluoroasetik turşu) ilə DAC-HB50 dinamik eksenel sıxılma sütunundan istifadə edin. Ayırma və təmizləmə üçün gradient elüsyonunu həyata keçirin. UV detektorundan istifadə edərək nümunəni aşkar edin və hədəf zirvəsinə uyğun peptid məhlulunu fraksiyalarla yığın.
Addım 3:HPLC təmizləndikdən sonra təmizliyi 99%-dən çox olan 180 ml Melanotan I trifluoroasetat məhlulu alın. Fırlanan buxarlanma yolu ilə məhlulu 50 ml-ə qədər konsentrə edin.
Addım 4:Xromatoqrafiya sütununu deionlaşdırılmış su ilə tarazlaşdırın və 50 ml təmizlənmiş Melanotan I trifluoroasetat məhlulu (təmizlik >99%) yükləyin. 2% sirkə turşusu sulu məhlul sistemində 50 dəqiqə elüt edin. Toplanmış hədəf məhsulu fırlanan buxarlanma yolu ilə 80 ml-ə qədər konsentrasiya edin. Nəhayət, 32,33% məhsuldarlıqla 5,33 q Melanotan I təmizlənmiş peptid əldə etmək üçün əvvəlcədən dondurularaq qurutma və dondurularaq qurutma həyata keçirin.
Göndərmə tarixi: 2026-01-05