ProteinExpressiya, hədəf genin süni bir vektora çevrilməsi və sonra heteroloji sistemdə zülalını ifadə etmək üçün onu alıcı hüceyrəyə və ya hüceyrəsiz sisteminə təqdim etmək texnologiyasına aiddir.
Protein ifadəsi, doğma zülalların əldə etmək çətin olduğunu həll edə bilər. 1970-ci illərdə heteroloji protein ifadəsinin ilk quruluşundan bəri, biotexnologiyanın və biotexniki tədqiqat və sənayenin davamlı inkişafını effektiv şəkildə təbliğ edən minlərlə rekombinant zülal uğurla ifadə edildi.
Məqsəd:
Protein ifadəsi ilə təbii mənbələrdən əldə etmək çətin olan zülalları əldə etmək mümkündür.
İkincisi, zülal ifadələrinin böyük partiyası və yüksək təmizliyi, hədəf zülalın analizini asanlaşdırmır, eyni zamanda maya dəyəri də azaldır.
Daha əhəmiyyətlisi, rekombinant zülalları ümumiyyətlə patogenik ev sahibinin bəzi potensial biosafety risklərindən qaçınmaq üçün adətən yüksək bir biosafetyəni göstərmək üçün seçilir.
Metod:
Əsasən gen fraqmentinin replikasının prosesləri, ifadə sistemi, induksiya edilmiş ifadə, məhsul təmizlənməsi və təhlili daxildir.
Protein ifadəsinə ümumi baxış
Təsnifat:
Protein ifadə sistemləri ümumiyyətlə bölünə bilər:
1. Nüvə İfadə Sistemi: Escherichia Coli, aydın genetik fon, rahat çoxalma, aşağı qiymət və yüksək ifadəin üstünlükləri olan ən çox yayılmış protein ifadə sistemidir. Bununla birlikdə, tərcümə modifikasiya mexanizmi yoxdur və protein ifadəsini dəyişdirmək üçün glikosilasiya və ya xüsusi seçim nöqtəsi parçalanması üçün uyğun deyil. Bacillus subtilisi də protein ifadəsi üçün də istifadə edilə bilər və üstünlükləri, tədricən diqqəti cəlb edən güclü metabolik ifadə qabiliyyəti və aşağı protez fəaliyyətdir.
2. Eukaryotik ifadə sistemi: Tərcümədən sonra müəyyən dərəcədə glikosylasiyadan sonra, eukaryotik zülalların təbii fəaliyyətinə daha yaxın olandan sonra əldə edilə bilər. Əsasən daxildir. ① maya ifadə sistemi (ümumi qırmızı maya, dəmlənmə mayası və s.), Maya yüksək sıxlıqlı yumşaq ola bilər, tərcümədən sonra dəyişdirilə bilər, prokaryotik və eukaryotik ev hüceyrələrinin üstünlükləri də var və yaxşı bir protein ifadə sistemidir. ② Həşərat hüceyrə ifadəsi sistemi: Ekzogen genlər, ifadə üçün Baculovirus Vector tərəfindən böcək hüceyrələrinə köçürülür. Membran zülalları, makromolekulyar zülallar, protein kinazaları və prokaryotik sistemdə ifadə etmək çətin olan digər zülallar üçün uyğun olan eukaryotik zülallar üçün yüksək bir ifadə sistemidir. ③ Mammalian Cell İfadə Sistemi: Mammalian hüceyrələrinin tərcüməsi və bəzək effektivliyi maya və böcək hüceyrə sistemlərindən daha yüksəkdir. Mammalyan hüceyrələrinin quruluşu və funksiyası doğma eukaryotik zülallara daha yaxındır, ancaq ifadə səviyyəsi azdır və dəyəri yüksəkdir.
3. Hüceyrəsiz ifadələr sistemi: Hədəf Proteinləri birbaşa hissəciklər və pcl məhsullarıdan, escherichia coli, buğda embrios, dovşan retikulositlərin və s.
Time: 2025-07-01